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  • 实验室清洁、消毒、灭菌方法

  • 来源:昆明市官渡区人民医院   发布时间:2021/04/28   点击:1159次

微生物实验室常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等,每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要,直接影响着整个实验能否顺利进行。清洁、消毒、灭菌是预防和控制微生物实验室污染的一个重要环节。它包括实验室内外环境的清洁、消毒;检测用具、培养基等的消毒、灭菌。

一、定义

(一)消毒是指杀灭或清除传播媒介上的病原微生物,使之达到无害化的处理。根据有无已知的传染源可分预防性消毒和疫源性消毒;根据消毒的时间可分为随时消毒和终末消毒。

(二)灭菌是指杀灭或清除传播媒介上的所有微生物(包括芽胞),使之达到无菌程度。

二、实验室材料的清洁      

清洁是指去除污垢、有机物和污渍。清洁方法包括刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清 洁剂的湿墩布拖擦。尘土、污物以及有机物是微生物的栖身之所,并可能影响除污染剂(抗菌剂、化学杀菌剂以及消毒剂)的杀菌作用。必须通过预清洁才能实现消毒和灭菌的目的。许多杀菌剂只对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。预清洁时必须小心,以避免暴露于感染性物质。预清洁时必须使用与以后使用的杀菌剂化学上相容的物质。非常普遍的是采用相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒。

三、消毒、灭菌原则

(一)明确消毒的主要对象应具体分析引起污染的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类,有针对性地使用消毒剂。

(二)采取适当的消毒方法根据消毒对象选择简便、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。

(三)控制影响消毒效果的因素许多因素会影响消毒剂的作用,而且各种消毒剂对这些因素的敏感性差异很大。

1.微生物的种类

不同类型的病原微生物对消毒剂抵抗力不同,因此,进行消毒时必须区别对待。

(1)细菌繁殖体易被消毒剂消灭,一般革兰氏阳性细菌对消毒剂较敏感,革兰氏阴性杆菌则常有较强的抵抗力。繁殖体对热敏感,消毒方法以热力消毒为主。

(2)细菌芽胞芽胞对消毒因子耐力最强,杀灭细菌芽胞最可靠的方法是热力灭菌,电离辐射和环氧乙烷熏蒸法。在化学消毒剂中,戊二醛、过氧乙酸能杀灭芽胞,但可靠性不如热力灭菌法。

(3)病毒对消毒因子的耐力因种类不同而有很大差异,亲水病毒的耐力较亲脂病毒强。

(4)真菌对干燥、日光、紫外线以及多数化学药物耐力较强,但不耐热(60℃1小时杀灭)。

2.微生物的数量

污染的微生物数量越多需要消毒的时间就越长,剂量越大。

3.有机物的存在

①有机物在微生物的表面形成保护层妨碍消毒剂与微生物的接触或延迟消毒剂的作用,以致于微生物逐渐产生对药物的适应性。

②有机物和消毒剂作用,形成溶解度比原来更低或杀菌作用比原来更弱的化合物。

③一部分消毒剂与有机物发生了作用,则对微生物的作用浓度降低。

④有机物可中和一部分消毒剂。消毒剂中重金属类、表面活化剂等受有机物影响较大,对戊二醛影响较小。

4.温度

随着温度的升高,杀菌作用增强,但温度的变化对各种消毒剂影响不同。如甲醛、戊二醛、环氧乙烷的湿度升高1倍时,杀菌效果可增加10倍。而酚类和酒精受温度影响小。

5.PH值

从两方面影响杀菌作用:

①对消毒剂的作用:改变其溶解度和分子结构。

②pH过高或过低对微生物的生长均有影响。

在酸性条件下,细菌表面负电荷减少,阴离子型消毒剂杀菌效果好。在碱性条件下,细菌表面负电荷增多,有利于阳离子型消毒剂发挥作用。

6.处理剂量与监测

保证消毒、灭菌处理的剂量,加强效果监测,防止再污染。

四、消毒、灭菌方法

(一)物理消毒灭菌法

物理消毒灭菌法,是利用物理因子杀灭微生物的方法。包括热力消毒灭菌、辐射消毒、空气净化、超声波消毒和微波消毒等。

1.热力消毒灭菌高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固(结构改变导致功能丧失),新陈代谢受到障碍而死亡,从而达到消毒与灭菌的目的。在消毒中,热力灭菌可分为湿热与干热两大类。

干热消毒灭菌

干热是指相对湿度在20%以下的高热。干热消毒灭菌是由空气导热,传热效果较慢。一般繁殖体在干热80-100℃中经1小时可以杀死,芽胞需160-170℃经2小时方可杀死。

(1)燃烧法是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法,因对物品的破坏性大,故应用范围有限。

(2)干烤法

电热培养箱:利用培养箱的热空气消毒灭菌。培养箱通电加热后的空气在一定空间不断对流,产生均一效应的热空气直接穿透物体。一般繁殖体在干热80-100℃中经1小时可以杀死,芽胞、病毒需160-170℃经2小时方可杀死。

微波消毒:微波是一种高频电磁波,其杀菌的作用原理,一为热效应,所及之处产生分子内部剧烈运动,使物体里外湿度迅速升高;一为综合效应,诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。

湿热消毒灭菌

湿热消毒灭菌是由空气和水蒸气导热,传热快,穿透力强,湿热灭菌法比干热灭菌法所需温度低、时间短。

手提式高压蒸汽灭菌器:为金属圆筒,分为二层,隔层内盛水,有盖,可以旋紧,加热后产生蒸汽。锅外有压力表,当蒸汽压力升高时,温度也随之相应升高。该灭菌器体积小,可自发蒸汽,便于携带。

卧式高压蒸汽灭菌器:其结构原理同手提式高压蒸汽灭菌器,因其体积大,一次可灭菌大量物品。操作人员须经专业培训,合格后方能上岗。

预真空式高压蒸汽灭菌器:在通入蒸汽前有一预处理阶段,即柜室内抽负压至2.6kPa(空气排除约98%),所以,预真空高压蒸汽灭菌器除有下排气式所具备的灭菌系统、蒸汽输送系统、控制系统、安全系统和仪表监测指示系统外,增加抽负压系统和空气过滤系统。机器运转由电脑控制。

紫外线消毒:在室温20℃~25℃时,220V 30W紫外灯下方垂直位置1.0m处的253.7nm紫外线辐射强度应70W/cm2,低于此值时应更换,适当数量的紫外灯,确保平均每立方米应不少于1.5W。

臭氧消毒:封闭无菌室内,无人条件下,采用20mg/m3浓度的臭氧,作用时间应30min。消毒后室内臭氧浓度0.2mg/m3时方可入内作业。

(二)化学试剂消毒

(1)甲醛消毒:按照甲醛(40%)10毫升/立方米、高锰酸钾5克/立方米计算用量。不同情况下,用量有所不同,但比例为2:1。盛药容器要大、耐热、耐腐蚀:一般用陶瓷或玻璃容器,因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性,且混合后反应剧烈,释放热量。房间要密闭:这样熏蒸效果才会好。

(2)乳酸重蒸法消毒:室内温度22℃,湿度75%~90%,按0.6 g/m3乳酸量共用9.6 g进行室内熏蒸,使蒸汽弥散全室,密闭门窗1 h。

化学消毒法因对人体伤害较大,不推荐使用。